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ACQUITY BEH色譜柱堵塞了怎么辦?教你如何讓色譜柱重獲新生

更新時(shí)間:2022-11-24      點(diǎn)擊次數(shù):2102

ACQUITY BEH色譜柱清洗、再生和存放


a. 清洗與再生

如果發(fā)生峰形改變、譜峰分叉、出現(xiàn)肩峰、保留時(shí)間改變、分離度變化或柱壓升高,說明色譜柱可能已被污染。通常情況下,用純有機(jī)溶劑進(jìn)行沖洗(小心避免緩沖鹽出現(xiàn)析出)就足以去除污染物。如果沖洗不能解決問題,可采用以下清洗和再生步驟。

 

ACQUITY UPLC BEH 100MM.jpg


根據(jù)樣品和/或您認(rèn)為污染色譜柱的物質(zhì)的性質(zhì),選擇與之匹配的常規(guī)清洗方法(見表3)。

 

3.ACQUITY BEH色譜柱的推薦pH和溫度限值

色譜柱

粒徑

孔徑

表面積

pH限值

溫度限值

配基密度

碳載量%

低pH

高pH

BEH C18

1.7μm

130Å

185m2/g

1-12

80℃

60℃

3.1μmol/m2

17.7

BEH C8

1.7μm

130Å

185m2/g

1-12

60℃

60℃

3.1μmol/m2

12.8

BEH苯基柱

1.7μm

130Å

185m2/g

1-12

80℃

60℃

3.0μmol/m2

14.5

BEH Shield RP18

1.7μm

130Å

185m2/g

2-11

50℃

45℃

3.2μmol/m2

16.6

BEH HILIC

1.7μm

130Å

185m2/g

1-9

60℃

45℃

BEH Amide

1.7μm

130Å

185m2/g

2-11

90℃

90℃

7.5μmol/m2

12

 

 

請(qǐng)使用20倍柱體積的溶劑沖洗色譜柱。升高柱溫可提高清洗效率。如果清洗和再生之后色譜柱性能仍然很差,請(qǐng)致電我們獲得更多支持。

 

50:50乙腈/水沖洗BEH HILIC色譜柱,去除極性污染物。如果此沖洗操作不能解決問題,可用5:95乙腈:水沖洗色譜柱。

 

要清洗BEH Amide色譜柱中的極性污染物,請(qǐng)運(yùn)行10 min內(nèi)水從0增加到100%的梯度。請(qǐng)注意,隨著水的比例上升,柱壓也將迅速增大。在含水量大于60%的條件下運(yùn)行時(shí),請(qǐng)降低流速。必要時(shí)請(qǐng)重復(fù)該操作。

 

ACQUITY UPLC BEH 150MM.jpg


4.反相色譜柱清洗順序

極性樣品

非極性樣品*

蛋白質(zhì)樣品

1.水

1.異丙醇(或適當(dāng)比例的異丙醇/水混合溶液** )

選項(xiàng)1:重復(fù)進(jìn)幾針二甲基亞砜(DM SO)

2.甲醇

2.四氫呋喃(THF)

選項(xiàng)2:使用10%~90% B的梯度,其中:A = 0.1%三氟(TFA)水溶液,B = 0.1%三氟酸(TFA)乙腈(CH3CN)溶液

3.四氫呋喃(THF)

3.二氯甲烷

4.甲醇

4.正己烷

5.水

5.異丙醇(然后使用適當(dāng)比例的異丙醇/水混合溶液** )

選項(xiàng)3:使用7 M鹽酸胍或7 M尿素沖洗色譜柱

6.流動(dòng)相

6.流動(dòng)相

 










 

* 在使用THF或正己烷之前,確保系統(tǒng)與這些溶劑兼容。只有在利用純反相有機(jī)溶劑(如乙腈)無法清洗色譜柱時(shí),方可考慮使用諸如THF或正己烷之類的溶劑。降低流速,使用較低的操作溫度并盡量減少系統(tǒng)與THF/或正己烷的接觸。

** 使用低有機(jī)溶劑含量的溶液,以避免出現(xiàn)緩沖鹽析出。

b. 存放

如果反相色譜柱需要在室溫下存放超過四天,應(yīng)將其保存于100%乙腈中。對(duì)于高溫應(yīng)用,請(qǐng)?jiān)谑褂煤罅⒓词褂?/span>100%乙腈保存色譜柱,以便盡可能延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。切勿使用

緩沖鹽保存色譜柱。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽,則先用10倍柱體積(常規(guī)色譜柱體積請(qǐng)參見表1)的HPLC級(jí)水沖洗反相ACQUITY BEH色譜柱,再用100%乙腈替換柱內(nèi)的水,然后

儲(chǔ)存。如果不執(zhí)行這個(gè)中間步驟,在引入100%乙腈時(shí),色譜柱內(nèi)可能會(huì)出現(xiàn)緩沖鹽析出。BEH Amide色譜柱在保存100%乙腈前先進(jìn)行梯度沖洗至100%乙腈以將所有水相溶劑從柱中沖洗干凈。將色譜柱完quan密封,防止柱床因溶劑蒸發(fā)而變干。

 

ACQUITY UPLC BEH.jpg


如果BEH HILIC色譜柱需要存放超過四天,應(yīng)將其保存于95:5乙腈:水中。切勿使用緩沖液保存色譜柱。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽,則用10倍柱體積的95:5乙腈:水沖洗色譜柱(常規(guī)

色譜柱體積請(qǐng)參見表1)。

 

注:如果色譜柱運(yùn)行了含甲酸鹽(如甲酸銨、甲酸等)的流動(dòng)相,并且之后使用100%乙腈進(jìn)行沖洗,那么在重新安裝色譜柱并再次運(yùn)行含甲酸鹽的流動(dòng)相時(shí),柱平衡花費(fèi)的時(shí)間可能略長(zhǎng)。

 

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